rAAV2VEGF165治疗小型猪急性冠状动脉闭塞的有效性研究Induction of neovascularization in pigs by recombinant adeno-associated virus 2 vector encoding human VEGF165 cDNA
蒋捷,邓晓莉,陈明,杨阳,施冰,康禹,吴小兵,高炜
摘要(Abstract)：
目的 在小型猪急性冠状动脉 (冠脉 )闭塞模型上 ,探讨重组腺相关病毒载体携带人血管内皮生长因子165基因 (rAAV2 VEGF165)治疗冠脉闭塞性疾病的有效性及其量效关系 ,为进一步应用rAAV2 VEGF165治疗慢性心肌缺血的研究探索较合适的剂量。方法 以微开胸心肌内注射的方法将rAAV2 VEGF165导入小型猪心肌 ,实验组分成 4个剂量组 (n =3) :1× 10 11v g(virusgenome) ,5× 10 11v g,1× 10 12 v g ,5× 10 12 v g。对照组 (n =3)注射磷酸盐缓冲液 (PBS)。采用RT PCR以及免疫组化方法观察各组VEGF165mRNA和蛋白的表达 ,通过心肌血管计数及冠脉造影 ,观察各剂量组促进血管生成的生物学效应。结果 术后 4周 ,各实验组心肌组织均可检测到VEGF165mRNA的表达 ,且各组VEGF165蛋白表达水平均高于对照组 ;1× 10 12 v g组及 5× 10 12 v g组心肌毛细血管密度大于对照组 ,5× 10 11v g组及其以上剂量组冠脉侧支循环分级的增加优于对照组。结论 心肌内注射rAAV2 VEGF165能在缺血心肌中有效表达VEGFmRNA及其蛋白 ,在一定剂量范围 ,rAAV2 VEGF165能够增加缺血心肌毛细血管密度 ,促进闭塞冠脉的侧支血管生成。结果显示 ,在小型猪心肌缺血模型上 ,rAAV2 VEGF1651× 10 12v g是较理想的剂量。
关键词(KeyWords)： 血管内皮生长因子;心肌缺血;基因疗法;依赖病毒
基金项目(Foundation): 国家高技术研究发展计划 (863计划 )资助(2 0 0 2AA2Z3 3 2 4)
作者(Author): 蒋捷,邓晓莉,陈明,杨阳,施冰,康禹,吴小兵,高炜
参考文献(References)：
- 1于雪,龚艳君,蒋捷,等.重组腺病毒相关病毒携带人血管内皮生长因子165诱导家兔缺血心肌血管生成的研究.中华老年心脑血管病杂志,2003,5:403405.
- 2伍志坚,吴小兵,曹晖,等.一种高效的重组腺伴随病毒载体生产系统.中国科学,C辑,2001,31:423430.
- 3ChomczynskiP ,SacchiN .Single stepmethodofRNAisolationbyacidguanidiniumthiocyanate phenol chloroformextraction.AnalBiochem,1987,162:156159.
- 4蒋捷,高炜,王日胜,等.血管内皮生长因子基因治疗小型猪冠状动脉闭塞的实验研究.中国介入心脏病学杂志,2001,9:220223.